基因治疗小圆桌：基因治疗制品的稳定性研究（二）

以病毒为载体的基因治疗制品具有遗传不稳定性和变异性，如何保证制品在货架期的稳定存在和在运输时的恶劣环境下稳定存在以及使用时对温度变化耐受等，都需要实验来模拟回答。影响稳定性的因素可能包括：内包材溶出物、储存时长、运输颠簸、高温、光照等。

前文从基因治疗制品稳定性研究的主要内容、样品要求和考察条件等展开叙述，本文将从基因治疗制品稳定性研究的时间设置、检测项目、运输稳定性等进行讨论和分析，希望给行业研发和质量控制人员以启发，共同推动基因治疗行业质量控制的进步，促进产业的健康发展。

对于成品，若有效期为2年及以上，需在第12个和第24个月，分别进行一次考察项目的检测，并在24个月后，根据具体稳定性研究目的设置适当的时间间隔进行考察项目的检定。对于有效期为1年以内的成品，则每3个月进行一次考察项目的检测。

长期稳定性研究时间点设定的一般原则是，第1年内每隔3个月检测1次，第2年内每隔6个月检测1次，第3年开始可以每年检测1次。若有效期（保存期）为1年或1年以内，则长期稳定性研究应为前3个月每月检测1次，以后每3个月1次。

在某些特殊情况下，可灵活调整检测时间，如基于初步稳定性研究结果，可有针对性地对产品变化剧烈的时间段进行更密集的检测。原则上，长期稳定性研究应尽可能地做到产品不合格为止。产品有效期的制定应根据长期稳定性研究结果设定。强制和加速稳定性研究也应尽可能地观察到产品不合格。

检测项目应包括产品质量变化敏感的，且反映产品安全性和/或有效性的考查项目，如效价、纯度、杂质和含量等。对于病毒载体类产品稳定性研究可参照《生物制品稳定性研究技术指导原则（试行）》和ICH Q5C要求，结合产品特性确定检测项目。

（1）活性：活性是稳定性研究中的重点研究项目，活性测定通常包括对基因转移效率（感染性/转导效率/传递效率）、治疗序列表达的水平、表达产物的功能或整个制品的直接活性（如肿瘤细胞杀伤活性等）的测定。活性应尽可能地采用定量的方法测定。活性测定需要采用相应的活性标准物质或参比物质，使用的参考品应该是经过标准化的物质，还需要关注应用参考品的一致性和其自身的稳定性。

（2）纯度和杂质：可采用HPLC、SDS-PAGE、紫外吸收（如A260/A280比值测定）等方法评估产品的总纯度水平。杂质包括制品相关杂质和工艺相关杂质，其中制品相关杂质的含量更能反映产品的稳定性，应分析载体降解及聚集情况。在强制因素研究中经过检测工艺相关杂质若未显著变化，可经过评估不列入长期稳定性考察项。降解产物的限度应根据临床前研究和临床研究所用各批样品分析结果的总体情况来制定。长期稳定性研究中，若发现有新的降解产物出现或者是含量变化超出限度时，建议对其进行鉴定，同时开展安全性与有效性的评估。

（3）含量：应对总颗粒数、感染性滴度或感染性颗粒数、基因组DNA/RNA进行分析，还应对总颗粒数或基因组拷贝数等物理数量与感染性滴度的比例进行测定。

（4）颗粒特性：病毒载体类基因治疗制品的颗粒特征容易受到贮存时间、温度、反复冻融等因素的影响而发生变化，是反映制品稳定性的重要指标，应进行考察，检测项目包括：可见异物、不溶性微粒、粒度和粒度分布、折射率、聚集体分析等。

（5）其他：一些检测项目也是稳定性研究中较为重要的方面，需要加以关注，如外观、pH值、无菌检查等。在特殊条件下，选用替代方法需要经过充分的验证后使用，如采用容器密封完整性测试替代稳定性研究过程中的无菌检查等。使用非破坏性容器密封完整性测试方法检测的样品，也可用于其他不受影响的质控检测项目。添加剂或赋形剂在制剂的效期内也可能降解，若初步稳定性试验有迹象表明这些物质的反应或降解对药品质量有不良影响时，应在稳定性研究中加以监测。稳定性研究中还应考虑到包装容器和密封系统可能对样品具有潜在的不良影响，在研究设计过程中应关注此方面，如增加包装系统密封性检测。

基因治疗制品要求冷链运输，对产品的运输过程应进行相应的稳定性模拟验证研究。稳定性研究中需充分考虑运输路线、交通工具、距离、时间、条件（温度、湿度、振动情况等）、产品包装情况（外包装、内包装等）、产品放置情况和监控器情况（温度监控器的数量、位置等）等。稳定性研究设计时，应模拟运输时的最差条件，如运输距离、振动频率和幅度及脱离冷链等。通过验证研究，应确认产品在运输过程中处于拟定的保存条件下可以保持产品的稳定性，并评估产品在短暂的脱离拟定保存条件下对产品质量的影响，应对产品脱离冷链的温度、次数、总时间等制定相应的要求。

稳定性研究中应建立合理的结果评判方法和可接受的验收标准。研究中不同检测指标应分别进行分析，且应对产品进行稳定性的综合评估。同时，开展研究的不同批次的稳定性研究结果应该具有较好的一致性，建议采用统计学的方法对批间的一致性进行判断。同一批产品，在不同时间点收集的稳定性数据应进行趋势分析，用以判断降解情况。

验收标准的制定应在考虑到方法学变异的前提下，参考临床用研究样品的检测值对其进行制定或修正，该标准不能低于产品的质量标准。通过稳定性研究结果的分析和综合评估，明确产品的敏感条件、降解途径、降解速率等信息，制定产品的保存条件和有效期（保存期）。

参考文献：

[1]基因治疗制品质量控制概述[J].中国药事,2023,37(06):611-644.

南京贝思奥 (BIONCE) 生物科技有限公司成立于2020年，公司致力于基于重组病毒的基因治疗药物的研发、生产与质量控制，并研制具有自主知识产权的临床基因治疗药物。主要用于治疗眼科疾病、神经系统疾病、恶性肿瘤、罕见病等，打造基因治疗技术研发创新基地。

微信号｜BIONCE_BIOTECH

关注我们